迪士尼彩乐园平台出租 基因敲除THP
THP-1细胞是从别称患有急性单核细胞白血病的1岁小男孩的外周血平分离得到的东谈主单核细胞白血病细胞，具有悬浮孕育并造成松散团块的特色，倍增时辰约为60-70小时。该细胞系被泛泛用于单核细胞和巨噬细胞联系的机制、信号通路以及养分和药物运载等盘问，是盘问免疫和炎症的逸想器具，大约被指引分化为巨噬细胞M1和M2，并开释相应的细胞因子。
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基因敲除THP-1细胞的应用 疾病机制与信号通路盘问：基因敲除THP-1细胞可用于探究疾病发生和发展的分子机制，非常是与免疫和炎症联系的疾病。通过敲除特定的基因，不错不雅察其对细胞功能、信号通路和细胞因子开释的影响，从而揭示疾病背后的生物学过程。举例，盘问东谈主员不错左右基因敲除THP-1细胞盘问巨噬细胞在动脉粥样硬化中的作用，以及泡沫细胞的造成机制。 药物筛选与疗效评估：基因敲除THP-1细胞亦然药物筛选和疗效评估的进军器具。通过构建特定基因的敲除模子，不错模拟患者的疾病现象，进而测试药物对疾病现象细胞的影响。这种款式不仅升迁了药物筛选的遵循，还不错裁汰药物研发的本钱和风险。举例，在盘问病毒性肺炎的调养过程中，盘问东谈主员左右基因敲除THP-1细胞评估了CypA和CD147在病毒指引的炎症反映中的作用，为斥地新的抗炎症药物提供了想路。 细胞调养与再生医学：在细胞调养和再生医学规模，基因敲除THP-1细胞也展现出高大的后劲。通过敲除或修饰特定基因，不错优化THP-1细胞分化为特定功能细胞的能力，为细胞调养提供更优质的细胞开头。此外，基因敲除THP-1细胞还不错用于构建疾病模子，为细胞替代疗法和基因调养提供可靠的试验平台。 伸开剩余70%了解微谨生物基因敲除细胞奇迹：13241131665（微信同号）
CRISPR/Cas9基因敲除THP-1细胞盘问案例案例一、基于CRISPR/Cas9手艺构建IDO1基因敲除的THP-1细胞株的盘问
该盘问旨在领受CRISPR/Cas9手艺构建吲哚胺-2,3-双加氧酶1（IDO1）基因敲除的THP-1细胞株，为盘问IDO1在巨噬细胞中的作用提供细胞模子。
盘问者绸缪了靶向IDO1基因的3条向导RNA（gRNA），构建了IDO1-gRNA重组质粒，并通过酶切及测序飞舞后包装成Lenti-IDO1-gRNA慢病毒。左右Cas9慢病毒感染THP-1细胞得回巩固抒发Cas9卵白的细胞株，再经Lenti-IDO1-gRNA慢病毒感染敲除IDO1基因，有限稀释法得回单克隆细胞株。通过T7E1酶切检测gRNA打靶遵循，PCR产品测序和Western blot飞舞IDO1基因敲除成果。收效构建了3种IDO1-gRNA重组质粒，并得回了3株THP-1 IDO1-KO单克隆细胞株。盘问发现，迪士尼彩乐园黑台子吗IDO1基因敲除可羁系THP-1细胞增殖，下调THP-1巨噬细胞CD11b、CD68抒发，上调CD14抒发，并增强THP-1巨噬细胞并吞功能。
该盘问收效构建了IDO1基因敲除的THP-1细胞株，并揭示了IDO1对THP-1细胞增殖活性、分化调停以及巨噬细胞并吞功能调停的进军作用，为后续进一步沟通IDO1基因在巨噬细胞中的功能及机制盘问奠定了基础。
案例二、GLP-1R基因敲除的THP-1细胞系建筑过头功能盘问
巨噬细胞具有高度异质性和可塑性，在不同系统中不同的疾病或合并疾病的不同阶段，巨噬细胞不错发生表型变化，从而合手行不同的功能。胰高血糖素样肽-1（GLP-1）在调控巨噬细胞迁徙及表型分化等方面发扬着一定作用。
该盘问旨在通过Cas9慢病毒介导的款式构建GLP-1R基因巩固敲除的THP-1细胞系，探究GLP-1R抒发对巨噬细胞迁徙和极化的影响。盘问者构建了针对GLP-1R基因的特异性打靶慢病毒载体，建筑了GLP-1R-/-THP-1细胞系，并使用嘌呤霉素进行筛选。通过基因测序和卵白踪影试验（Western blot）进行飞舞后，离别用佛波酯（PMA）、侵略素γ（INF-γ）+脂多糖（LPS）、白介素4（IL-4）刺激野生型组（WT组）和GLP-1R-/-组（KO组），进一步构建WT组和KO组的M0、M1、M2型巨噬细胞模子。左右流式细胞术检测细胞名义分子的抒发，qRT-PCR检测联系mRNA的抒发，以及Transwell和划痕试验检测GLP-1R对巨噬细胞的迁徙情况。基因测序及Western blot狂妄确认GLP-1R-/-THP-1细胞系构建收效。流式细胞术狂妄流露，M0型巨噬细胞高抒发CD14+，M1型高抒发CD14+CD80+，M2型高抒发CD14+CD206+。qRT-PCR狂妄流露，与WT组比拟，KO组指引得到的巨噬细胞中M1型巨噬细胞标记物mRNA抒发显然升高，M2型巨噬细胞标记物mRNA抒发权贵裁汰。此外，GLP-1R大约影响巨噬细胞的迁徙。
该盘问收效构建了一株GLP-1R基因敲除的THP-1细胞系，并通过对不同细胞系的指引分化盘问得出GLP-1R基因穷乏可指引巨噬细胞分泌促炎因子，向M1型巨噬细胞极化；而GLP-1R则可促使巨噬细胞分泌抗炎因子，向M2型巨噬细胞极化。这一发现为长远了解GLP-1在巨噬细胞功能调停中的作用提供了新的视角。
总而言之，基因敲除THP-1在文件中的代表性盘问进展体现时多个方面，包括构建特定基因的敲除模子、揭示基因在巨噬细胞中的作用机制以及为疾病调养和药物筛选提供新的想路和款式等。
微谨生物敲除细胞构建经过
微谨生物专注于提供全面的基因剪辑奇迹，咱们左右先进的基因剪辑手艺，包括但不限于CRISPR/Cas9系统，为客户提供精确的基因剪辑惩办决策。奇迹范围泛泛，涵盖细菌、真菌等微生物的基因剪辑，以及细胞层面的基因剪辑，具体包括基因敲除、敲入、点突变等多种应用。
此外，微谨生物还有效强项的KO细胞现货库（包括自建细胞平台及分享平台）和微生物菌种库，掩饰热点盘问规模，幽闲您的千般科研需求。
发布于：广东省